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原因一：這可能是因為您在構建載體的時候插入片段是非定向的，這種情況一般在T/A克隆的時候比較常見。

原因二：如果您指定的正向測序引物距離克隆位點較近，我們通常改用距離克隆位點較遠的反向引物進行測序，所以得到的測序結果與您的預期方向是不一致的，這種情況下，您只需用Chromas看圖軟件把圖翻轉過來，就可以得到正向序列。